1、應保證培養基厚度為4±0.5mm

2、Etest條應存儲于放有干燥劑的-20℃冰箱的密封容器內，使用前應提前20分鐘取出平衡至室溫

3、0.5麥氏單位菌懸液制備，比濁儀應定期進行校準，至少每半年一次。制備菌懸液時，先使用空白無菌鹽水調零再檢測，從孵育18到24小時的血平皿等非選擇性平皿上用無菌棉拭子調取3-5個形態相同的單個菌落，用0.85%的生理鹽水制成菌懸液，將濃度調整至0.5麥氏單位。

4、如使用比濁管，按以上同樣方法配置菌懸液，比濁前應先將標準比濁管顛倒混勻，然后與菌懸液并排置于黑白相間檢測背景前進行比對

5、菌液配備完成后應在15分鐘內接種，將無菌棉拭子先飽和吸收菌液，在靠緊管壁擠壓出多余的水份，在瓊脂表面化個米字后延三個方向均勻密涂，每次涂布將平皿旋轉60度。最后再延平皿內圓涂抹一周。也可使用菌液旋轉涂布儀將菌液涂布均勻，注意棉拭子移動速度不要太快，以免涂布時產生縫隙，涂布好菌液的平皿在室溫下放置10～15分鐘，使菌液吸收至瓊脂表面干燥。

6、使用鑷子將ETEST條貼在藥敏平皿上，由于藥物貼在平皿上后會立即擴散，所以一旦ETEST條貼在平皿上就不能再移動。ETEST條貼好后應在15分鐘內將平皿倒置后放入攝氏35度孵箱進行孵育18-24小時

7、肺炎鏈球菌等苛養菌應在5%二氧化碳孵箱孵育；厭氧菌在厭氧條件下孵育；其他非苛養菌在普通孵箱孵育

8、孵育完成后取出平皿放于黑色背景下判讀，讀取抑菌圈與ETEST的試條的相交處刻度為菌株MIC，讀取鏈球菌結果時應注意菌胎生長處結果，而不是溶血環處結果。